Colorimetrische Methode - eine Analyse, die auf einem Vergleich der Farbsättigung der untersuchten und bekannten Substanzen basiert. Die Ergebnisse physikalischer und chemischer Tests sind für viele Wissenschaftszweige von großem Wert, aber vor allem wird die Forschung in der Medizin verwendet.
Die Essenz der kolorimetrischen Methode
Es gibt viele Arten von Tests, die die chemische Zusammensetzung von Substanzen bestimmen. Einige von ihnen sind universell und in verschiedenen Bereichen weit verbreitet, andere sind spezifisch und mit höherer Genauigkeit. Die kolorimetrische Methode ist universell.
Der Kern der Analyse besteht darin, dass die Farbsättigung einer Lösung unbekannter Konzentration mit der Farbe einer Standardlösung verglichen wird. Während der Analyse entsteht durch die Wechselwirkung der untersuchten Komponente mit einem bestimmten Reagenz eine farbige Verbindung. Nach Beendigung der Reaktion wird der resultierende Farbton mit der Farbe der Lösungen verglichen, deren Konzentration bereits bekannt ist.
Es wird angenommen, dass der Begründer der Farbmetrik Robert Boyle ist. Er benutzte SqueezeTannine, um Eisen in Lösung von Kupfer zu unterscheiden. Es war Boyle, der bemerkte, dass je höher die Eisenkonzentration in der Lösung war, desto satter der Ton der letzteren war.
Farbmetrik
Die Kolorimetrie ist eine Methode zur Bestimmung der Menge eines Stoffes in Lösungen. Die Analyse basiert auf dem Bouguer-Lambert-Beer-Gesetz: Wenn ein Lichtstrahl auf eine dichte absorbierende Schicht einer Substanz trifft, wird seine Intensität schwächer.
Die kolorimetrische Methode zur Bestimmung der Konzentration einer Substanz kann einen visuellen Vergleich oder einen Vergleich mit speziellen Instrumenten zur Messung der Farbintensität verwenden. Der Vergleich erfolgt direkt und kompensatorisch.
- Gerade. Das Verfahren beinh altet den Vergleich des Farbniveaus der Testlösung bei einer bestimmten Dichte und Temperatur der Flüssigkeit mit einer Referenzlösung. Bei der Verwendung von Photokolorimetern und Spektralphotometern wird destilliertes Wasser als Referenzlösung verwendet. Die Geräte messen die Stromstärke, die von der Lichtstärke abhängt.
- Ausgleich. Das Verfahren basiert darauf, die Farbe der untersuchten Probe auf die Referenzprobe zu bringen. Das Ergebnis wird durch Zugabe eines Lösungsmittels oder Erhöhung der Schichthöhe des gefärbten Mediums erreicht.
Die Verwendung eines Spektrophotometers, Monochromators und anderer Präzisionsinstrumente vereinfacht die ohnehin schon einfache Forschungsmethode weiter und ermöglicht es Ihnen, die Genauigkeit der Ergebnisse zu erhöhen. Diese Geräte sind in der Lage, die Lichtdurchlässigkeit zu messen und die Wellenlänge zu bestimmen.
Wo die Analyse angewendet wird
Das kolorimetrische Analyseverfahren wird angewendet, wenn die genaue chemische Zusammensetzung bekannt ist, eine Referenzprobe zum Vergleich vorhanden ist und die Temperatur von Test- und Referenzprobe gleich ist. Wenn Sie schnell die Menge einer farbigen Substanz bestimmen müssen, diese aber so gering ist, dass die analytische Methode nicht anwendbar ist.
Die Farbmetrik wird in der Medizin häufig für die klinische biochemische Forschung und andere Bereiche eingesetzt:
- pharmazeutische Industrie;
- Lebensmittel- und Alkoholindustrie;
- Agronomie (Bestimmung der Bodenqualität).
Vor- und Nachteile
Die kolorimetrische Methode hat wie jede andere Vor- und Nachteile.
Zu den Vorteilen gehören:
- einfache Analyse, minimale Vorbereitungsverfahren;
- Testmöglichkeit auch mit wenig Testmaterial;
- kostspielige Geräte sind nicht nötig, obwohl in letzter Zeit vermehrt moderne Geräte zum Einsatz kommen, die nicht ganz billig sind. Aber sie liefern das genaueste Ergebnis.
Nachteile: geringe Genauigkeit der Analyse im Vergleich zu analytischen Methoden.
Biuret-Methode zur Proteinbestimmung
Protein im Blutserum ist ein Indikator, der den Zustand der Homöostase widerspiegelt. Eine Erhöhung der Konzentration einer makromolekularen Verbindung im Blut wird als Hyperproteinämie bezeichnet, ein niedriger Geh alt als Hypoproteinämie.
Proteine reinBlutserum haben eine andere Zusammensetzung, Struktur, Eigenschaften, erfüllen unterschiedliche Funktionen. Sie werden in Enzyme, Hormone, Immunglobuline und andere unterteilt. Alle Proteingruppen haben eine Reihe gemeinsamer Eigenschaften, auf deren Grundlage Methoden zur Bestimmung makromolekularer organischer Verbindungen in biologischen Flüssigkeiten entwickelt wurden.
Von allen Methoden der klinischen Biochemie werden am häufigsten kolorimetrische Methoden zur Proteinbestimmung eingesetzt. Sie sind relativ billig, was für Budgetorganisationen wichtig ist. und sind ganz einfach. Am gebräuchlichsten ist die Biuret-Methode. Die Essenz der Methode: Proteine reagieren im alkalischen Milieu mit Kupfersulfat und bilden violette Verbindungen. Der Proteingeh alt im Blut wird durch die Sättigung der Färbung bestimmt. Biomaterial zur Analyse wird morgens auf nüchternen Magen eingenommen.
Die Analyse ist sehr genau, aber es gibt Faktoren, die die Proteinkonzentration im Blut beeinflussen:
- körperliche Aktivität kurz vor der Biomaterialentnahme;
- letzte Schwangerschafts- und Stillwochen;
- die Verwendung der Medikamente Corticotropin, Miscleron, Clofibrat erhöht den Proteingeh alt im Blut und die Verwendung von Pyrazinamid und Östrogen - um die Konzentration zu verringern;
- falsche Handh altung bei Biomaterialprobenahme.
Bestimmung von Eisen
Der Eisengeh alt im Blut ist einer der Hauptindikatoren bei der Diagnose verschiedener Krankheiten. Die Substanz ist in Hämoglobin angereichert, das den Sauerstofftransport zu den Geweben gewährleistet. FürBestimmung von Eisen durch die kolorimetrische Methode, am häufigsten wird eine Lösung von Bathophenanthrolin (0,02%) als Hauptreagenz verwendet. Biomaterial - Serum ohne Spuren von Hämolyse.
Die Essenz der Methode: Die Wechselwirkung von Eisen(II)-Ionen und sulfatiertem Bathophenanthrolin bildet einen farbigen Komplex, dessen Sättigung photometrisch bestimmt wird. Um eine klare Lösung zu erh alten, müssen die Regeln für die Probenahme des Biomaterials befolgt werden, aber um die optischen Dichten von Eisen-Ligand-Komplexen genau zu bestimmen, wird Eisen mit Hydroxylamin und Detergenzien (Natriumdodecylsulfat) aus Hämoglobin freigesetzt. Das Testergebnis bestimmt das Vorhandensein und den Grad der Pathologie. Die normale Eisenkonzentration sollte sein:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (Männer);
- 10, 6- 21, 7 µmol/L (Frauen).
Eisenmangel ist normalerweise mit Blutverlust, unzureichender Nahrungsaufnahme oder schlechter Resorption aus dem Magen-Darm-Trakt verbunden.
Cholesterintest
Cholesterin ist eine organische Substanz, die in der Zellwand vieler Organismen, einschließlich des Menschen, vorkommt. Es ist für die Produktion von Cholecalciferol und Steroidhormonen notwendig. Ein Cholesterinwert von 3,37-5,2 mmol/L gilt als normal. Erhöhter Inh alt ist eine der Hauptursachen für Atherosklerose.
Colorimetrische Methoden zur Cholesterinbestimmung ermöglichen es Ihnen, Gefäßerkrankungen frühzeitig zu erkennen. Nach pathoanatomischen Ergebnissen im tödlichen Ausgang der Ischämie, die Konzentration von lipophilem Alkohol bei Patientenlag bei 6,5-7,8 mmol/L.
Das Prinzip der kolorimetrischen Methode besteht darin, dass Cholesterin durch 3beta-Hydroxysteroid-Oxidoreduktase oxidiert wird, wodurch Wasserstoffperoxid freigesetzt wird, das p-Aminoatipyrin in eine farbige Verbindung umwandelt. Der Geh alt an Cholesterin wird durch die Farbsättigung bestimmt.
Bei der Durchführung eines Tests bei einem Kind muss berücksichtigt werden, dass die Cholesterinkonzentration im Kindes alter 4,1 mmol / l nicht überschreiten sollte.
Was ist die enzymatische kolorimetrische Methode?
Enzymatische Tests basieren auf der Verwendung von Reaktionen durch Enzyme mit hoher Aktivität. Sie werden in der analytischen Chemie häufig zur Bestimmung verschiedener Substanzen eingesetzt - von Nitrationen bis hin zu Makromolekülen.
Enzymatische (enzymatische) Methoden sind spezifisch und ermöglichen die Analyse bestimmter Substanzen in Gegenwart anderer Substanzen mit ähnlicher Zusammensetzung. Die gebräuchlichsten Methoden basieren auf der Verwendung des Enzyms - Glucoseoxidase. Der Test wird verwendet, um die Konzentration von Glukose im Blut zu bestimmen. Die Genauigkeit des Tests ermöglicht es, die Dosierung hypoglykämischer Mittel bei Patienten mit Typ-2-Diabetes anzupassen.
Die Glukose-Oxidationsmittel-Methode gilt als eine der besten quantitativen Methoden zur Bestimmung von Glukose. Als Biomaterial kann sowohl Blut (Kapillare) als auch Serum verwendet werden, Plasma ist jedoch vorzuziehen, da es einen niedrigeren Hämatokritgeh alt hat, was die Genauigkeit des Ergebnisses negativ beeinflusst.
Die kinetische Methode der Photometrie wird hauptsächlich verwendet. Sein Wesen liegt darin, dassdas etablierte Verhältnis von Glucoseoxidase und Peroxidase für eine bestimmte Zeit nach Beginn der Reaktion, die Bildungsrate einer farbigen Verbindung dem Glucosegeh alt in der Probe entspricht. Der Hauptvorteil des Tests besteht darin, dass das Ergebnis nicht durch das Vorhandensein von Fremdverbindungen in der Probe beeinflusst wird. Die Methode hat auch einen Nachteil: Für den Test werden teure Messgeräte deutscher oder schwedischer Hersteller benötigt.
Schlussfolgerung
Die kolorimetrische Methode ist genau und einfach anzuwenden. Seine Verwendung in der Medizin ermöglicht die Früherkennung verschiedener pathologischer Veränderungen im Körper. Mit der Einführung neuer Technologien wird die Methode verbessert und erfreut sich immer größerer Beliebtheit.
